目前PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)要求至少應(yīng)該分為三個(gè)區(qū)域，即試劑準(zhǔn)備區(qū)、核酸制備區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)，如果要對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行開(kāi)放性鑒定，如雜交、電泳等操作，原則需要增加第四個(gè)區(qū)。實(shí)驗(yàn)室分區(qū)的主要目的是避免純化核酸和擴(kuò)增產(chǎn)物逆向污染前一個(gè)區(qū)域，但多年的經(jīng)驗(yàn)表明，無(wú)論是三區(qū)還是四區(qū)的設(shè)置，似乎都沒(méi)有完全杜絕實(shí)驗(yàn)室污染的發(fā)生。

反而羅氏COBAS“一體機(jī)”引入實(shí)驗(yàn)室后，乙肝20IU/ML的敏感性能夠長(zhǎng)期保持良好，極少有系統(tǒng)污染的發(fā)生，實(shí)驗(yàn)室分區(qū)的意義受到一定程度的質(zhì)疑！仔細(xì)對(duì)比就不難發(fā)現(xiàn)，羅氏COBAS并不能避免樣本交叉污染，因?yàn)檫@一環(huán)節(jié)是由實(shí)驗(yàn)室工作人員完成的，是管理問(wèn)題而不是檢驗(yàn)問(wèn)題；COBAS在核酸制備過(guò)程中，經(jīng)常發(fā)生核酸純化的Tip頭吹出氣泡和氣泡破裂的情況，雖然這種情況并不常見(jiàn)，但核酸純化和試劑分配共用一個(gè)空間是事實(shí)，有研究報(bào)道，COBAS檢測(cè)28個(gè)樣本，有2個(gè)污染（JCM, 2011,P2854-2858），我們也從21個(gè)陰性樣本中發(fā)現(xiàn)一個(gè)污染，COBAS的污染就像普通實(shí)驗(yàn)室一樣存在，但令人驚奇的是，從未像普通實(shí)驗(yàn)室那樣發(fā)生系統(tǒng)性污染，但有一點(diǎn)可以說(shuō)明，氣溶膠或許并不是實(shí)驗(yàn)室污染的主要原因。

分析我國(guó)大多PCR實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)項(xiàng)目不難發(fā)現(xiàn)，近80%的實(shí)驗(yàn)室采用熒光PCR試劑盒進(jìn)行臨床檢測(cè)，即這部分實(shí)驗(yàn)室不存在開(kāi)放性核酸鑒定環(huán)節(jié)，試劑工作液的配制多在核酸制備完成后進(jìn)行，依存“試劑配置與PCR擴(kuò)增之間的時(shí)間越短越好”的原則，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室的試劑配制均在核酸制備室完成，也就是說(shuō)，試劑配制室的存在基本被忽視，了解了羅氏COBAS的操作方式，這種做法便顯得無(wú)可厚非！核酸制備完成并加入PCR反應(yīng)液后，移管到擴(kuò)增室，由于采用封閉核酸鑒定的方法，這樣擴(kuò)增室的設(shè)置也同樣顯得多余！以羅氏COBAS為鏡，臨床PCR實(shí)驗(yàn)室是否分區(qū)便顯得無(wú)足輕重了！但這并不是說(shuō)PCR實(shí)驗(yàn)室不需要分區(qū)，因?yàn)閮x器自動(dòng)化控制的機(jī)械臂，與實(shí)驗(yàn)室操作人員的操作習(xí)慣和對(duì)規(guī)則的執(zhí)行力是有著本質(zhì)差別的！這或許就是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格分區(qū)后的實(shí)驗(yàn)室，污染同樣存在的主要原因！

那么PCR實(shí)驗(yàn)室究竟應(yīng)如何建設(shè)才能有利于污染的預(yù)防和有效清除？

其實(shí)污染就是PCR擴(kuò)增管中摻入了原來(lái)樣本不存在的擴(kuò)增核酸，那么這個(gè)不受歡迎的核酸是怎么來(lái)到PCR擴(kuò)增管里的？如果排除試劑盒、儀器和人員操作等環(huán)節(jié)，核酸氣溶膠和灑落的樣本與核酸的清除是實(shí)驗(yàn)室建設(shè)應(yīng)該重點(diǎn)考慮的環(huán)節(jié)。

實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)首先要有通風(fēng)設(shè)置，通風(fēng)是PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)應(yīng)該考慮的基本條件，如果采用封閉彩鋼板建設(shè)的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)進(jìn)行壓差設(shè)置，即自試劑準(zhǔn)備室、核酸制備室到擴(kuò)增室依次呈負(fù)壓，但清潔新風(fēng)應(yīng)從室外引進(jìn)，新風(fēng)過(guò)濾網(wǎng)應(yīng)定期更換，否則便成為污染的來(lái)源。其次是實(shí)驗(yàn)室墻面和地面具有防水功能，也就是墻面和地面可以水洗！每個(gè)房間設(shè)置地漏，方便“實(shí)驗(yàn)室的清潔”，當(dāng)實(shí)驗(yàn)室污染發(fā)生時(shí)，即可使用“水洗實(shí)驗(yàn)室”的方法有效清除污染，清除過(guò)程使用的是0.2%有效氯溶液，它不但有效斷裂核酸片段，而且還具有淬滅熒光基團(tuán)，有利于PCR實(shí)驗(yàn)室熒光本底的去除。但過(guò)量使用反而會(huì)影響試劑擴(kuò)增效率。消毒液清洗后應(yīng)該使用自來(lái)水或清潔水進(jìn)行再次清洗，特別是設(shè)備表面。實(shí)驗(yàn)室空氣中的污染清除，可以用有效氯溶液進(jìn)行噴霧。

總之，PCR實(shí)驗(yàn)室過(guò)度分區(qū)和分割，不但浪費(fèi)空間，影響人員操作，常常不利于污染物的擴(kuò)散和清除，相信在不久的將來(lái)，隨著試劑盒技術(shù)的發(fā)展，一個(gè)房間可實(shí)現(xiàn)PCR的試劑準(zhǔn)備、核酸純化和PCR擴(kuò)增的所有功能，而污染的預(yù)防和清除也會(huì)顯得十分簡(jiǎn)單。