消毒用品凈化車間衛(wèi)生管理制度
Hygienic standard for disinfection in hospitals
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
GB 15982-2012 代替 GB 15982-1995
2012-06-29發(fā)布 2012-11-01實(shí)施
前言
本標(biāo)準(zhǔn)所有技術(shù)內(nèi)容均為強(qiáng)制性。
本標(biāo)準(zhǔn)取代GB15982-1995醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。與GB15982-1995相比，本標(biāo)準(zhǔn)的主要變化如下：
--修改了標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍（見第一章，1995年版第一章）；
--修改規(guī)范性引用文件（見第二章，1995年版第二章）；
--修改術(shù)語(yǔ)，增加消毒產(chǎn)品、醫(yī)療器械和高度。中低危險(xiǎn)設(shè)備、滅菌和高水平、中低水平消毒、多種耐藥細(xì)菌的定義（見第3章，1995年版第3章）；
--修改了各種環(huán)境空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(見4.1、4.2，1995版4.1)；
--修改醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(見4.3，1995年版4.2)；
--修改使用中消毒劑的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(見4.6，1995版4.3)；
--刪除無(wú)菌器械保存液衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(見1995年版4.3.2)；
--增加治療用水、防護(hù)用品、消毒劑、消毒器械、疫點(diǎn)（區(qū)）消毒衛(wèi)生要求（見4.4.4.5.4.4.4.7、4.9）
--修了污水處理衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)和污水排放標(biāo)準(zhǔn)(見4.8，1995版4.4和4.5)；
--增加醫(yī)院消毒管理要求（見第五章）；
--修改了原附錄A的采樣檢查方法(見附錄A，1995版附錄A)；
--修改空氣采樣及檢查方法(見A.2，1995版A.1)；
--修改醫(yī)療用品采樣及檢查方法(見A.5，1995版A.5)；
--增加治療用水、紫外線燈、消毒設(shè)備、醫(yī)院污水檢查方法、疫點(diǎn)（區(qū)）消毒效果檢測(cè)方法和大腸。
--菌群檢查方法(見A.7.A.8.A.9.A.1.A.12)；
--刪除原附錄B本標(biāo)準(zhǔn)用詞說(shuō)明(見1995版附錄B)；
--添加新附錄B試劑與培養(yǎng)基(見附錄B)。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部提出并歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江省疾病預(yù)防控制中心、北京市疾病預(yù)防控制中心、中國(guó)疾病預(yù)防控制中心、北京大學(xué)第一醫(yī)院、北京長(zhǎng)江脈醫(yī)藥科技有限公司、杭州朗索醫(yī)用消毒劑有限公司、上海利康消毒高新技術(shù)有限公司、強(qiáng)生（上海）醫(yī)療器械有限公司、上海九宇生物科技有限公司、北京創(chuàng)新世紀(jì)生化科技發(fā)展有限公司、衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督中心、上海市疾病預(yù)防控制中心、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、武漢市疾病預(yù)防控制中心、福建省疾病預(yù)防控制中心、浙江興昌風(fēng)機(jī)有限公司。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：胡國(guó)慶、鄧小紅、張流波、李六億、喬宏、戴彥珍、孫建生、邊雪蓮、顧京宇、沈偉、徐燕、梁建生、林立旺、陳楚暉、任銀萍、王志、張一鳴。
本標(biāo)準(zhǔn)所所代替標(biāo)準(zhǔn)版本的發(fā)布情況如下：
-GB15982-1995。
醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、醫(yī)院消毒管理要求和檢查方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)。各級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和采血供血機(jī)構(gòu)按照規(guī)定執(zhí)行。
2 規(guī)范性引用文件。
以下文件對(duì)本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用至關(guān)重要。所有注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。
GB4789.3食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)。
食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)GB4789.4。
GB/T489.11食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)溶血性鏈球菌檢驗(yàn)。
GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。
GB7918.4化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法綠膿桿菌。
GB7918.5化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法金黃色葡萄球菌。
GB18466醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)。
GB19082醫(yī)用一次性防護(hù)服技術(shù)要求。
GB19083醫(yī)用防護(hù)口罩技術(shù)要求。
GB19193疫源消毒總則。
GB19258紫外線殺菌燈。
GB50333醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范。
WS310.1醫(yī)院消毒供應(yīng)中心第一部分：管理規(guī)范。
WS310.2醫(yī)院消毒供應(yīng)中心第二部分：清洗消毒及滅菌技術(shù)操作規(guī)范。
WS310.3醫(yī)院消毒供應(yīng)中心第三部分：清洗消毒及滅菌效果監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。
WS/T311醫(yī)院隔離技術(shù)規(guī)范。
WS/T313醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范。
YY0469醫(yī)用外科口罩技術(shù)要求。
YY0572血液透析及相關(guān)治療用水。
消毒技術(shù)規(guī)范衛(wèi)生部。
國(guó)家環(huán)?？偩轴t(yī)院污水處理技術(shù)指南。
中華人民共和國(guó)藥典衛(wèi)生部。
衛(wèi)生部醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法。
3 以下術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。
3.1消毒產(chǎn)品disinfectionproduct。列入衛(wèi)生部《消毒產(chǎn)品分類目錄》，用于醫(yī)院消毒的消毒劑、消毒器械和衛(wèi)生用品。
3.2醫(yī)療器械medicaldevice/healthcareproduct。
用于診斷、治療、護(hù)理、支持和替代的設(shè)備、設(shè)備和物品的總稱。根據(jù)使用中感染的風(fēng)險(xiǎn)程度，分為高危醫(yī)療器械、中危醫(yī)療器械和低危醫(yī)療器械。
3.2.1高危醫(yī)療器械criticaldevice/items。
進(jìn)入正常的無(wú)菌組織，脈管系統(tǒng)或無(wú)菌體液（如血液）流過(guò)，一旦被微生物污染，就會(huì)導(dǎo)致極高的感染風(fēng)險(xiǎn)。
3.2.2中度危險(xiǎn)性醫(yī)療器械semi-criticaldevice/items。
直接或間接接觸粘膜的設(shè)備。
3.2.3低危醫(yī)療器材no-criticaldevice/items。
只接觸完整皮膚而不接觸粘膜的設(shè)備。
3.3滅菌sterilization。在醫(yī)療器械上殺滅或清除所有微生物。滅菌的無(wú)菌保證水平應(yīng)達(dá)到10-6。
3.4高水平消毒high-leveldisinfection。殺滅各種細(xì)菌繁殖體、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌孢子。
3.5中水平消毒intermediate-leveldisinfection。殺滅除細(xì)菌芽孢外的各種病原微生物。
3.6低水平消毒low-leveldisinfection。只能殺滅細(xì)菌繁殖體（分枝桿菌除外）和親脂性病毒。
3.7多種耐藥菌multidrug-resistantorganism；MDRO。三種或三種以上的抗三種以上抗菌藥物同時(shí)呈現(xiàn)耐藥細(xì)菌。常見的多種耐藥細(xì)菌包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、耐萬(wàn)古霉素腸球菌(VRE)、超廣譜β一內(nèi)酰胺酶(ESBLS)細(xì)菌、耐碳青霉烯抗菌藥物腸桿菌(CRE)(如新德里金屬β內(nèi)酰胺酶[NDM-1]或碳青霉烯酶[KPC]腸桿菌)、耐碳青霉烯抗菌藥物鮑曼不動(dòng)桿菌(CR-AB)、多種耐藥/泛耐藥銅綠假單胞菌(MDR/PDR-PA)和多種耐藥結(jié)核分枝桿菌。
4 醫(yī)院消毒衛(wèi)生要求。
4.1各種環(huán)境空氣，物體表面。
4.1.1菌落總數(shù)應(yīng)符合表1要求。
第一類環(huán)境是采用空氣清潔技術(shù)的診斷和治療場(chǎng)所，分為清潔手術(shù)部和其他清潔場(chǎng)所。第二類環(huán)境為非潔凈手術(shù)部（室）；產(chǎn)房；導(dǎo)管室；血液病房、燒傷病房等保護(hù)性隔離病房；重癥監(jiān)護(hù)病房；新生兒室等。第三類環(huán)境為母嬰同室；消毒供應(yīng)中心檢查包裝滅菌區(qū)和無(wú)菌物品儲(chǔ)存區(qū)；血液透析中心（室）；其他普通住院病房等。第四類環(huán)境為普通門（急診）及其檢查、治療室；傳染病科門診和病房。
表1 各類環(huán)境空氣、物體表面菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
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環(huán)境類別
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空氣平均菌落數(shù)a
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物體表面平均菌落數(shù)CFU/cm2
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CFU／皿
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CFU/m3
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I類環(huán)境
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潔凈手術(shù)室
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符合GB 50333要求
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≤150
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≤5．0
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其他潔凈場(chǎng)所
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≤4. 0(30 min)b
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Ⅱ類環(huán)境
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≤4. 0(15 min)
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--
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≤5．0
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Ⅲ類環(huán)境
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≤4. 0(5 min)
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--
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≤10．0
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Ⅳ類環(huán)境
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≤4.0(5 min)
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--
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≤10．0
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a CFU／皿為平板暴露法，CFU/m3為空氣采樣器法。
b 平板暴露法檢測(cè)時(shí)的平板暴露時(shí)間。
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4.1.2當(dāng)涉嫌醫(yī)院感染或疑似暴發(fā)與醫(yī)院環(huán)境有關(guān)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行目標(biāo)微生物檢測(cè)。
4.2醫(yī)務(wù)人員手。
4.2.1消毒后，醫(yī)務(wù)人員手表面菌落總數(shù)應(yīng)≤10CFU/cm2。
4.2.2外科手消毒后，醫(yī)務(wù)人員手表面菌落總數(shù)應(yīng)≤5CFU/cm2。
4.3醫(yī)療器械。
4.3.1高危醫(yī)療器械應(yīng)無(wú)菌。
4.3.2中度危險(xiǎn)醫(yī)療器械菌落總數(shù)應(yīng)≤20CFU/件(CFU/g或CFU/100cm2)，不得檢測(cè)致病微生物。
4.3.3低度危險(xiǎn)醫(yī)療器械菌落總數(shù)應(yīng)≤200CFU/件(CFU/g或CFU/100cm2)，不得檢測(cè)致病微生物。
4.4治療用水。
血液透析相關(guān)治療用水應(yīng)符合YY0572要求；其他治療用水應(yīng)符合相應(yīng)的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。
4.5防護(hù)用品。
醫(yī)用防護(hù)口罩、外科口罩、一次性防護(hù)服等防護(hù)用品應(yīng)符合GB19083.YY0469和GB19082
4.6消毒劑。
4.6.1滅菌劑。皮膚粘膜消毒劑應(yīng)采用純化水或無(wú)菌水，其他消毒劑應(yīng)符合GB5749的要求。
4.6.2使用中消毒劑的有效濃度應(yīng)符合使用要求；每天使用前應(yīng)監(jiān)測(cè)連續(xù)消毒劑的有效濃度。
4.6.3滅菌消毒劑的菌落總數(shù)為0CFU/ml；皮膚粘膜消毒劑的菌落總數(shù)應(yīng)符合相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)要求；其他消毒劑的菌落總數(shù)應(yīng)≤100CFU/ml，不得檢測(cè)致病微生物。
4.7消毒器械。
4.7.1使用中消毒殺菌因子強(qiáng)度應(yīng)符合使用要求。紫外線燈應(yīng)符合GB19258的要求，紫外線燈(30W)的輻射照度值應(yīng)≥70uW/cm2。
4.7.24.7.2工作環(huán)境中產(chǎn)生的有害物質(zhì)濃度(強(qiáng)度)應(yīng)符合有關(guān)規(guī)定。臭氧消毒設(shè)備的工作環(huán)境臭氧濃度應(yīng)為0.16mg/m3。環(huán)氧乙烷滅菌器的工作環(huán)境應(yīng)為2mg/m3。
4.8污水處理。
污水排放應(yīng)符合GB18466的要求。
4.9疫點(diǎn)(區(qū))消毒。
消毒效果應(yīng)符合GB19193的要求。
5 醫(yī)院消毒管理要求
5.1建筑布局及消毒隔離設(shè)施。
5.1.1建筑設(shè)計(jì)和工作流程應(yīng)滿足傳染病防治和醫(yī)院感染控制的需要，消毒隔離設(shè)施配置應(yīng)滿足。
WS/T311及《消毒技術(shù)規(guī)范》相關(guān)規(guī)定。
5.1.2傳染病科、消毒供應(yīng)中心(室)、手術(shù)部(室)、重癥監(jiān)護(hù)病房、血液透析中心(室)、新生兒室、內(nèi)鏡中心(室)、口腔科等重點(diǎn)部門的建筑布局和消毒隔離應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定。
5.1.3潔凈場(chǎng)所的設(shè)計(jì).驗(yàn)收參照GB50333的要求，完成全性能監(jiān)測(cè)應(yīng)由合格的第三方單位完成。
5.1.4II類環(huán)境及門診(急診)。病房等診療場(chǎng)所應(yīng)按WS/T313要求配置合適的手衛(wèi)生設(shè)施，并提供洗手清潔劑、手消毒劑和干手設(shè)施。
5.2消毒產(chǎn)品使用管理。
5.2.1使用的消毒產(chǎn)品應(yīng)符合國(guó)家有關(guān)法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范等管理規(guī)定，并按照批準(zhǔn)或規(guī)定的范圍和方法使用。
5.2.2含氯消毒劑、過(guò)氧化氫消毒劑等揮發(fā)性消毒劑應(yīng)配備現(xiàn)用消毒劑；過(guò)氧乙酸、二氧化氯等二元消毒劑活化后應(yīng)立即使用。使用化學(xué)消毒和滅菌的醫(yī)療設(shè)備，使用前應(yīng)用無(wú)菌水（過(guò)濾后的生活飲用水可用于高水平消毒內(nèi)鏡）充分沖洗，以去除殘留物。不得使用過(guò)期和無(wú)效的消毒劑。醫(yī)療設(shè)備不得采用甲醛自然熏蒸法進(jìn)行消毒。滅菌管腔醫(yī)療設(shè)備不得采用戊二醛熏蒸法進(jìn)行消毒。
5.2.3滅菌器需要驗(yàn)證滅菌效果的，應(yīng)當(dāng)由省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門認(rèn)定的消毒鑒定實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。滅菌物品的無(wú)菌檢查應(yīng)當(dāng)按照《中華人民共和國(guó)藥典》和《無(wú)菌檢查法》的要求進(jìn)行。使用消毒設(shè)備滅菌的消毒者，經(jīng)培訓(xùn)合格后方可上崗。
5.3重復(fù)清洗醫(yī)療器械。
按WS310.2執(zhí)行清洗程序。對(duì)傳染病病原體污染有特殊要求的醫(yī)療器械，應(yīng)先消毒后清洗。
5.4消毒滅菌方法選擇原則。
5.4.1高危醫(yī)療器械在使用前應(yīng)進(jìn)行滅菌。使用中度危險(xiǎn)醫(yī)療器械前，應(yīng)選擇高水平消毒或中水平消毒。使用低危險(xiǎn)設(shè)備前，可選擇低水平消毒或保持清潔。
5.4.2耐濕性。耐熱的醫(yī)療設(shè)備應(yīng)首選壓力蒸汽滅菌；管腔和（或）閥門設(shè)備應(yīng)采用滅菌程序或外部設(shè)備供應(yīng)商提供的滅菌方法。
5.4.3玻璃滅菌是玻璃設(shè)備、油劑和干粉物品的首選；其他方法應(yīng)符合《消毒技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定。
5.4.4不耐熱、不耐濕的醫(yī)療器械應(yīng)選用經(jīng)國(guó)家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的低溫滅菌方法。
5.4.5重復(fù)使用的氧氣濕化瓶.吸引瓶.嬰兒暖箱水瓶和加熱加濕罐應(yīng)采用高水平消毒。
5.5環(huán)境.物體表面消毒。
5.5.1環(huán)境。物體表面應(yīng)保持清潔；肉眼可見污染時(shí)應(yīng)及時(shí)清潔消毒。
5.5.2經(jīng)常接觸的物體表面，如治療車、床欄、床頭柜、門把手、燈開關(guān)、水龍頭等，應(yīng)每天清潔消毒。
5.5.3當(dāng)患者的血液、嘔吐物、糞便或病原微生物被污染時(shí)，應(yīng)根據(jù)具體情況選擇中等水平以上的消毒方法。對(duì)于少量（10ml）的飛濺，可在消毒前進(jìn)行清潔；對(duì)于大量（>10ml）的血液或體液飛濺，應(yīng)使用吸濕材料去除可見污染，然后進(jìn)行清潔和消毒。
5.5.4人員流動(dòng)頻繁。擁擠的診療場(chǎng)所應(yīng)每天工作后進(jìn)行清潔和消毒。傳染病科。重癥監(jiān)護(hù)病房。保護(hù)隔離病房（如血液病房。燒傷病房）。耐藥菌和多種耐藥菌污染的診療場(chǎng)所應(yīng)隨時(shí)消毒和終末消毒。
5.5.5拖把(頭)和抹布應(yīng)清洗、消毒、干燥后備用。建議使用脫卸拖頭。
5.6通風(fēng)和空氣消毒。
5.6.1應(yīng)采用自然通風(fēng)和(或)機(jī)械通風(fēng)，確保診療場(chǎng)所的空氣循環(huán)和通風(fēng)次數(shù)；采用機(jī)械通風(fēng)時(shí)，重癥監(jiān)護(hù)室等重點(diǎn)部門應(yīng)采用頂送風(fēng)、下回風(fēng)，建立合理的氣流組織。
5.6.2呼吸道發(fā)熱門診及其隔離觀察室(區(qū))。呼吸道傳染病收治病房采用集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)的，應(yīng)在通風(fēng)系統(tǒng)中安裝空氣消毒裝置。無(wú)空氣清潔技術(shù)的手術(shù)室、重癥監(jiān)護(hù)病房、保護(hù)性隔離病房(如血液病房、燒傷病房)應(yīng)在通風(fēng)系統(tǒng)中安裝空氣消毒裝置。
5.6.3空氣消毒方法應(yīng)遵循《消毒技術(shù)規(guī)范》。化學(xué)噴霧不宜用于空氣消毒。
5.7消毒供應(yīng)中心(室)管理。
WS.310要求消毒供應(yīng)中心(室)的建筑布局及清潔。
5.8污水污水處理。
5.8.1醫(yī)院污水處理設(shè)施的設(shè)計(jì)、建設(shè)和管理應(yīng)符合GB18466和《醫(yī)院污水處理技術(shù)指南》的要求。
5.8.2醫(yī)療廢物管理應(yīng)符合《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》和《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法》的要求。
5.9疫點(diǎn)(區(qū))消毒。應(yīng)符合GB19193的要求。
附錄A
（規(guī)范性附錄）
采樣及檢查方法
A.1采樣檢查原則。
A.1.1取樣后，應(yīng)盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)，送檢時(shí)間不得超過(guò)4h；樣品保存在O℃~4℃時(shí)，送檢時(shí)間不得超過(guò)24h。
A.1.2不建議醫(yī)院對(duì)滅菌物品進(jìn)行常規(guī)無(wú)菌檢查。當(dāng)流行病學(xué)調(diào)查懷疑醫(yī)院感染事件與滅菌物品有關(guān)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)物品的無(wú)菌檢查。常規(guī)監(jiān)督檢查不得進(jìn)行致病性微生物檢測(cè)，涉及疑似醫(yī)院感染爆發(fā)、醫(yī)院感染爆發(fā)調(diào)查或工作中懷疑微生物污染時(shí)，應(yīng)進(jìn)行目標(biāo)微生物檢測(cè)。
A.1.3可使用經(jīng)驗(yàn)證的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)儀器監(jiān)督篩查環(huán)境、物體表面等微生物污染和醫(yī)療器械清潔度；也可用于醫(yī)院清潔效果檢查和清潔程序的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。
A.2空氣微生物污染檢查方法。
A.2.1采樣時(shí)間。
一類環(huán)境在清潔系統(tǒng)自凈后與從事醫(yī)療活動(dòng)前取樣；二、三、四類環(huán)境在消毒或規(guī)定通風(fēng)后與從事醫(yī)療活動(dòng)前取樣。
A.2.2檢測(cè)方法。
A.2.2.1I環(huán)境可選用平板暴露法和空氣采樣器法，參照GB50333《醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范》要求進(jìn)行檢測(cè)?？諝獠蓸悠鞣蛇x用六級(jí)沖擊式空氣采樣器或其他經(jīng)驗(yàn)證的空氣采樣器。檢測(cè)時(shí)，采樣器應(yīng)放置在室內(nèi)中心0.8m~l.5m的高度，并按照采樣器使用說(shuō)明書操作，每次采樣時(shí)間不得超過(guò)30min。如果房間大于10m2，每增加10m2增加一個(gè)采樣點(diǎn)。
A.2.2.2、三、四類環(huán)境采用平板暴露法。室內(nèi)面積≤30m2，內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)距墻1m；室內(nèi)面積>30m2，4角和中心5點(diǎn)，4角布點(diǎn)距墻1m。普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板（直徑90mm）放置各取樣點(diǎn)，取樣高度為0.8m~l.5m；取樣時(shí)，打開平板蓋，扣在平板旁邊，暴露規(guī)定時(shí)間（二類環(huán)境暴露15min，三類環(huán)境暴露5min），蓋上平板蓋及時(shí)檢查。
A.2.2.3將36℃±1℃的恒溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病微生物。
A.2.3結(jié)果計(jì)算。
A.2.3.1平板暴露法按平均每皿菌落數(shù)報(bào)告：CFU/(皿暴露時(shí)間)。
A.2.3.2型(1)空氣采樣器法的計(jì)算公式:
A.3物體表面微生物污染檢測(cè)方法。
A.3.1采樣時(shí)間。
對(duì)潛在污染區(qū)毒后采樣。清潔區(qū)根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)情況確定。
采樣面積A.3.2。
表面≥100cm2，取100cm2。
A.3.3采樣方法。
將5cm×5cm滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用浸有無(wú)菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水或生理鹽水取樣液，在規(guī)格板內(nèi)水平、垂直涂抹5次，然后轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，連續(xù)取樣1~4個(gè)規(guī)格板面積，切斷手接觸部分，將棉拭子放入裝有10ml取樣液的試管中進(jìn)行檢查。門把手等小物體直接用棉拭子取樣。如果取樣物體表面有消毒劑殘留，取樣液應(yīng)含有相應(yīng)的中和劑。
A.3.4檢測(cè)方法。
采樣管充分振蕩后，取不同稀釋倍數(shù)的洗脫液1.0ml接種平盤，將熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每盤冷至40℃~45℃，注入15ml~20ml，36℃±1℃恒溫箱48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病微生物。
A.3.5結(jié)果計(jì)算[如式(A.2)]
A.4醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生檢查方法。
A.4.1采樣時(shí)間。
在接觸病人或從事醫(yī)療活動(dòng)前，取樣手部衛(wèi)生后。
用無(wú)菌0.03mol/L磷酸鹽緩沖液或生理鹽水取樣液將棉拭子從手指曲面到手指來(lái)回涂抹兩次(一只手涂抹面積約30cm2)，然后轉(zhuǎn)動(dòng)取樣棉拭子，切斷手接觸部位，將棉拭子放入裝有10ml取樣液的試管中進(jìn)行檢查。取樣面積按平方厘米(cm2)計(jì)算。如果取樣時(shí)手上有消毒劑殘留，取樣液應(yīng)含有相應(yīng)的中和劑。
A.4.2采樣方法。
A.4.3檢測(cè)方法。
采樣管充分振蕩后，取不同稀釋倍數(shù)的洗脫液1.OML接種平盤，將熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每盤冷至40℃~45℃，注入15ml~20ml，36℃±1℃恒溫箱48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，必要時(shí)分離致病微生物。
A.4.4結(jié)果計(jì)算[如式(A.3)]
A.5醫(yī)療器材檢查方法。
A.5.1采樣時(shí)間。
消毒或滅菌后，在儲(chǔ)存有效期內(nèi)取樣。
A.5.2滅菌醫(yī)療器材檢查方法。
A.5.2.1可采用破壞性方法取樣的，如一次性輸液（血）器、注射器、注射針等，按照《中華人民共和國(guó)藥典》中的無(wú)菌檢查法進(jìn)行。對(duì)于不能采用破壞性方法取樣的醫(yī)療設(shè)備，在環(huán)境清潔度1萬(wàn)級(jí)以下的單向流空氣區(qū)域或隔離系統(tǒng)中，將浸入無(wú)菌生理鹽水取樣液的棉拭子涂抹在被檢物體表面，取樣全部表面或不少于100cm2；然后將棉拭子除去手接觸部分進(jìn)行無(wú)菌檢查。
A.5.2.2牙科手機(jī):每部手機(jī)應(yīng)放置在單向流空氣區(qū)域或隔離系統(tǒng)中，環(huán)境潔凈度在10000級(jí)以下的局部潔凈度在100級(jí)以下，分別放置在含有20ml~25ml采樣液的無(wú)菌大試管(內(nèi)徑25mm)中，液位高度應(yīng)大于4.0cm，在渦旋混合器上沖擊30s以上，取洗脫液進(jìn)行無(wú)菌檢查。
A.5.3消毒醫(yī)療器材的檢查方法。
A.5.3.1全部可放入無(wú)菌試管，用洗脫液浸泡后震蕩30s以上，取洗脫液1.OML接種平皿，將熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿倒入15ml~20ml，36℃±1℃恒溫箱48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)(CFU/件)，必要時(shí)分離致病微生物。
A.5.3.2如果可以通過(guò)破壞性方法取樣，則在100級(jí)超凈工作臺(tái)上取1glog樣品，放入配有10ml采樣液的試管中進(jìn)行洗脫，取洗脫液1.OmL接種平皿，計(jì)數(shù)菌落數(shù)(CFU/g)，必要時(shí)分離致病性微生物。對(duì)于不能用破壞性方法取樣的醫(yī)療器械，在100級(jí)超凈工作臺(tái)上，用浸入無(wú)菌生理鹽水采樣液的棉拭子在被檢物體表面涂抹采樣。
A.5.3.3消毒后內(nèi)鏡：取清洗消毒后內(nèi)鏡，用無(wú)菌注射器提取含有相應(yīng)中和劑的50ml洗脫液，從活檢口注入洗滌內(nèi)鏡管道，并充分收集（蠕動(dòng)泵）進(jìn)行檢查。將洗脫液充分混合，取洗脫液1.0ml接種平板，將熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基倒入15ml~20ml，36℃±1℃恒溫箱48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)（CFU/件）。剩余洗脫液在無(wú)菌條件下用濾膜（0.45μm）過(guò)濾濃縮，將濾膜連接到凝固的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上（注意不要產(chǎn)生氣泡），在36℃±1℃溫箱中培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。
當(dāng)濾膜法不能計(jì)數(shù)時(shí)：
菌落總數(shù)(CFU/件)=m(CFU/平板)×50...(A.4)
式中：
m-平行平板平均菌落數(shù)。
濾膜法可計(jì)數(shù)時(shí)：
菌落總數(shù)(CFU/件)=m(CFU/平板)mf(CFU/濾膜)...(A.5)
式中：
m-平行平板平均菌落數(shù)；
mf-濾膜上的菌落數(shù)。
A.6消毒劑檢查方法。
A.6.1消毒劑采樣。
采樣分為庫(kù)存消毒劑和使用中的消毒劑。
A.6.2消毒劑有效成分含量檢查方法。
庫(kù)存消毒劑的有效成分含量應(yīng)按照《消毒技術(shù)規(guī)范》或產(chǎn)品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)；上述方法可用于測(cè)量消毒劑的有效濃度，也可用于監(jiān)測(cè)國(guó)家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的消毒劑濃度試紙（卡）。
A.6.3采用中消毒劑染菌量檢查方法。
A.6.3.1用無(wú)菌吸管按無(wú)菌操作方法吸收1.0ml檢測(cè)消毒劑，加入9ml中和劑混合均勻。醇類和酚類消毒劑用普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中和，含氯消毒劑，含碘消毒劑和過(guò)氧化物消毒劑0.1%硫代硫酸鈉中和劑，洗必泰，季銨鹽消毒劑含0.3%吐溫80.3%卵磷脂中和劑，醛類消毒劑含0.3%甘氨酸中和劑。
A.6.3.2用無(wú)菌吸管吸收一定稀釋比例的中和后混合物1.0ml接種平皿，將熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基倒入15ml~20ml，冷至40℃~45℃，36℃±1℃恒溫箱培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)；必要時(shí)分離致病微生物。
消毒劑染菌量(CFU/ml)=平均每株菌落數(shù)×10×稀釋倍數(shù)...(A.6)
A.7水檢方法。
YY0572檢測(cè)血液透析相關(guān)治療用水。其他治療用水按相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
A.8紫外線燈檢查方法。
A.8.1紫外線燈采樣。
采樣分為庫(kù)存紫外線燈和使用中的紫外線燈。
A.8.2檢查庫(kù)存(新啟用)紫外線燈輻射照度值。
按GB19258進(jìn)行。
A.8.3采用中紫外線燈輻射照度值檢查方法。
A.8.3.1儀器法。打開紫外線燈5min后，將測(cè)定波長(zhǎng)為253.7nm的紫外線輻射計(jì)探頭放置在被檢紫外線燈下垂直距離1m的中心。儀器穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)為紫外線燈的輻射照度值。
A.8.3.2指示卡法。打開紫外線燈5min后，將指示卡放置在紫外線燈下垂直距離1m處，圖案一側(cè)向上，照射1min，觀察指示卡色塊的顏色，并將其與標(biāo)準(zhǔn)色塊進(jìn)行比較。
A.8.4注意事項(xiàng)。
紫外線輻照計(jì)應(yīng)當(dāng)在計(jì)量部門批準(zhǔn)的有效期內(nèi)使用；紫外線監(jiān)測(cè)指示卡應(yīng)當(dāng)經(jīng)國(guó)家衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)，并在產(chǎn)品有效期內(nèi)使用。
A.9消毒器械檢查方法。
A.9.1殺菌因子強(qiáng)度測(cè)定:按照《消毒技術(shù)規(guī)范》或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行檢測(cè)。
A.9.2工作環(huán)境中有害物質(zhì)濃度(強(qiáng)度)的測(cè)定:按照《消毒技術(shù)規(guī)范》或相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)試。
A.10醫(yī)院污水檢查方法。
檢測(cè)按GB18466規(guī)定進(jìn)行。
A.11疫點(diǎn)(區(qū))消毒效果檢測(cè)方法。
檢測(cè)按GB19193規(guī)定進(jìn)行。
A.12大腸菌群檢查方法。
檢測(cè)按GB4789.3進(jìn)行。
A.13沙門茵檢查方法。
檢測(cè)按GB4789.4進(jìn)行。
A.14乙型溶血性鏈球菌檢測(cè)方法。
檢測(cè)按GB/T4789.11進(jìn)行。
A.15銅綠假單胞菌檢查方法。
檢測(cè)按GB7918.4進(jìn)行。
A.16金黃色葡萄球菌檢查方法。
檢測(cè)按GB7918.5進(jìn)行。
A.17其他目標(biāo)微生物檢測(cè)方法。
按相關(guān)檢測(cè)方法進(jìn)行。
附錄B
（規(guī)范性附錄）
試劑和培養(yǎng)基
B．10.03 moI/L磷酸鹽緩沖液(0.03 moI/L PBS)
稱取磷酸氫二鈉2.84 g，磷酸二氫鉀1.36 g，加入到1000 mL蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)pH至7. 2～7.4，于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B．2洗脫液
稱取蛋白胨10. 00 g，氯化鈉8.50 g，吐溫-80 1.0mL，加入到1 000 mL 0.03mol/L磷酸鹽緩沖液中，加熱溶解后調(diào)pH至7.2～7.4，于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B．3生理鹽水
稱取氯化鈉8. 50 g，溶解于1000 mL蒸餾水中，于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B．4 革蘭染色液及染色方法
B. 4.1結(jié)晶紫染色液：稱取結(jié)晶紫1.00 g，溶解于20 mL 95%酒精中，然后與80 mL 1%草酸銨水溶液混合。
B．4.2革蘭碘液：稱取碘1. 00 g，碘化鉀2.00 g，混合后加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300 mL，混勻。
B．4.3沙黃復(fù)染液：稱取沙黃0. 25 g，溶解于10 mL 95%酒精溶液中，然后加入90 mL蒸餾水，混勻。
B．4.4染色方法如下：
a)將涂片在火焰上固定。
b)滴加結(jié)晶紫染色液，作用1 min，水洗。
c)滴加革蘭碘液，作用1min，水洗。
d)酒精脫色30 s；或?qū)⒕凭螡M整個(gè)涂片，立即傾去，再用酒精滴滿整個(gè)涂片，脫色10 s。
e)水洗，滴沙黃復(fù)染液，作用1 min，水洗。
f)待干鏡檢。
B．5人（兔）血漿
取滅菌3.8%檸檬酸鈉1份，加人（兔）全血4份，混勻靜置，3 000 r／min離心5 min，取上清，棄血球
B．6 普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
B．6.1 成分：蛋白胨10 g、牛肉膏5g、氯化鈉5g、瓊脂15 g、蒸餾水1000 mL。
B．6.2制作方法：除瓊脂外其他成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.2～7.4，加入瓊脂，加熱溶解，分裝于121℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B．7血瓊脂培養(yǎng)基
B．7.1 成分：營(yíng)養(yǎng)瓊脂100 mL、脫纖維羊血（或兔血）10 mL。
B．7.2制作方法：將營(yíng)養(yǎng)瓊脂加熱熔化待冷至50℃左右，以無(wú)菌操作將10 mL脫纖維血加入后搖勻，傾注平皿，置冰箱備用。
B．8 需-厭氧菌培養(yǎng)基
B．8.1成分：酪胨（胰酶水解）15 g、牛肉膏3g、葡萄糖5g、氯化鈉2.5 g、L-胱氨酸0.5 g、硫乙醇酸鈉0.5 g、酵母浸出粉5 g、新鮮配制的0.1%刃天青溶液1．o mL或新配制的0.2%亞甲藍(lán)溶液0.5 mL、瓊脂0.5 g～0. 7g、蒸餾水1 000 mL。
B．8.2制作方法：除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入蒸餾水中，微溫溶解后，調(diào)pH至弱堿性，煮沸、濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)pH至6.9～7.3，分裝后115℃壓力蒸汽滅菌30 min。
B．9 SCDLP液體培養(yǎng)基
B．9.1 成分：酪蛋白胨17 g、大豆蛋白胨3g、葡萄糖2.5 g、氯化鈉5g、磷酸氫二鉀2.5 g、卵磷脂lg、吐溫-80 7g、蒸餾水1 000 mL。
B．9.2制作方法：將各種成分混合（如無(wú)酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替），加熱溶解后，調(diào)pH至7.2～7.3，分裝于121℃壓力蒸汽滅菌20 min，搖勻，冷至25℃使用。
B．10伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基
B．10.1成分：蛋白胨10 g、乳糖10 g、磷酸二氫鉀2g、2%伊紅溶液2 mL、0.65%美藍(lán)溶液1 mL、瓊脂17 g、蒸餾水1000 mL。
B．10.2制作方法：將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.1，分裝后121℃壓力蒸汽滅菌20 min。臨用時(shí)，以無(wú)菌操作加入乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至50℃時(shí)，加入伊紅和美藍(lán)溶液搖勻，傾注平皿，置4℃冰箱備用。
B．11 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基
B．11.1 成分：胨10 g、氯化鈉5g、葡萄糖5g、肉浸液1000 mL。
B．11.2制作方法：取胨與氯化鈉加入肉浸液內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)pH至弱堿性，煮沸，加入葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)pH至7.0～7.4，分裝，于115℃壓力蒸汽滅菌30 min。
B．12甘露醇培養(yǎng)基
B．12.1 成分：蛋白胨10 g、牛肉膏5g、氯化鈉5g、甘露醇10 g、0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液12 mL、蒸餾水1 000 mL。
B．12.2 將蛋白胨、氯化鈉、牛肉膏加入蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)pH至7.4，加入甘露醇和溴麝香草酚藍(lán)混勻后，分裝，于115℃壓力蒸汽滅菌20 min。
B．13 乳糖膽鹽發(fā)酵管 GB 15982-2012
B．13.1成分：蛋白胨20 g、豬膽鹽（或牛，羊膽鹽）5g、乳糖10 g、0.04%溴甲酚紫水溶液25 mL、蒸餾水1 000mL。
B．13.2制作方法：將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.4，加入0.04%溴甲酚紫水溶液，分裝(每管10 mL)，并放入一個(gè)發(fā)酵管，于115℃壓力蒸汽滅菌15 min。
B．14乳糖發(fā)酵管
B．14.1 成分：蛋白胨20 g、乳糖10 g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL、蒸餾水1 000 mL。
B．14.2制作方法：將蛋白胨及乳糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.4，加入0.04%溴甲酚紫水溶液，分裝(每管10 mL)，并放入一個(gè)發(fā)酵管，于115℃壓力蒸汽滅菌15 min。
B．15溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基
B．15.1 成分：蛋白胨10 g、葡萄糖5g、2%溴甲酚紫酒精溶液0.6 mL、蒸餾水1000 mL。
B．15.2制作方法：將蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7．O～7.2，加入2%溴甲酚紫酒精溶液，搖勻后，分裝(每管5 mL)，并放入一個(gè)發(fā)酵管，于115℃壓力蒸汽滅菌30 min，置4℃冰箱備用。
B．16綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基
B．16.1 胨20 g、氯化鎂（無(wú)水）1.4 g、硫酸鉀10 g、甘油10 mL、瓊脂18 g～20 g、蒸餾水1 000 mL。
B．16.2制作方法：取胨、氯化鎂、硫酸鉀加入水中，微溫使溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后為7.2～7.4，分裝于小試管，滅菌。
B．17 明膠培養(yǎng)基
B．17.1 胨5 g、明膠120 g、牛肉浸出粉3g、蒸餾水1 000 mL。
B．17.2取上述各成分加入水中，浸泡約20 min，隨時(shí)攪拌，加熱使溶解，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2～7.4，分裝于小試管，滅菌。
B．18 注意事項(xiàng)
B．18.1 雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分為乳糖膽鹽發(fā)酵管的2倍；3倍濃縮乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分為乳糖膽鹽發(fā)酵管的3倍。
B．18.2培養(yǎng)基用的試管口和三角燒瓶口應(yīng)用棉塞或硅膠制成的塞子，再用牛皮紙包好。
B．18.3試劑與培養(yǎng)基配制好后應(yīng)置清潔處保存，常溫下不超過(guò)1個(gè)月。培養(yǎng)基推薦4℃冷藏保存。
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